гены ighv не подвергались соматической гипермутации что это значит
Гены ighv не подвергались соматической гипермутации что это значит
Многочисленные исследования показывают, что разные варианты хронического лимфолейкоза заметно отличаются по течению и прогнозу.
То, что мутационный статус IgVH-генов при хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ) отражает наиболее существенные биологические особенности заболевания, подтверждается тем обстоятельством, что именно мутационный статус оказался наиболее значимым прогностическим фактором течения хронического лимфолейкоза и реакции на терапию.
Проведенный несколькими исследовательскими группами анализ выживаемости больных с различным мутационным статусом показал, что при отсутствии мутаций медиана выживаемости при современной терапии колеблется от 79 до 119 мес, в то время как при их наличии нередко составляет 200—300 мес, а некоторые больные этой группы никогда не нуждаются в лечении. В наблюдении из Англии 144 больных в начальной стадии (стадия А по Binet) были прослежены в течение 27 лет.
Все больные с отсутствием мутаций IgVH-генов умерли в течение первых 12 лет болезни. Из 27 больных с мутациями IgVH-генов за 27 лет от хронического лимфолейкоза умерли только двое. Медиана выживаемости больных в группе без мутаций IgVH равнялась 109 мес, в группе с мутациями — 293 мес. Французская группа, сопоставив мутационный статус, клиническую стадийность и выживаемость 145 больных, установила, что при начале наблюдения в стадии А медиана выживаемости в группе с отсутствием мутаций составила 97 мес, в то время как не была достигнута за 12 лет наблюдения в группе с мутациями (р = 0,0017), а время до прогрессирования в более продвинутую стадию составило соответственно 42 и 156 мес.
Иммунофенотип опухолевых клеток при различных лимфопролиферативных заболеваниях
Статистически значимая разница в выживаемости сохранялась и в стадиях В и С: в группе с отсутствием мутаций она равнялась 78 мес, в группе с мутациями — 120 мес (р = 0,002).
Из этого положения существует исключение. Показано, что в случаях функционирования у больного IgVH-генов, относящихся к семейству VH3-21, как правило, имеются соматические мутации IgVH-генов, однако прогноз соответствует прогнозу у больных без мутаций этих генов. Обнаружено, что у большинства больных ХЛЛ с мутировавшими IgVH-генами длина теломер в лимфоцитах значительно больше, чем у больных без мутаций этих генов.
Если оценивать не только мутационный статус IgVH-генов, но и гена BCL-6, больных хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ) можно разделить на 3 группы: имеющих мутации IgVH и BCL-6, не имеющих мутаций вообще и имеющих мутации lgVH, но не имеющие мутаций гена BCL-6. Разделив на указанные 3 группы 200 больных в стадии А и сопоставив время от начала заболевания до необходимости в лечении, Е. Sarsotti и соавт. получили наилучшие показатели в группе с мутациями IgVn, но без мутаций BCL-6.
В этой группе у всех больных отмечалось стабильное состояние, и за 10-летний срок наблюдения только одному из 34 больных потребовалось лечение. Эти показатели принципиально отличались от показателей в группе без мутаций IgVH и BCL-6. За время наблюдения 38 % больных потребовалось лечение с медианой времени от начала заболевания до необходимости в терапии 44 мес. Эти показатели оказались близкими к показателям в группе с мутациями IgVH и BCL-6: 32 % больных этой группы потребовалось лечение с медианой от начала заболевания до необходимости в лечении 55 мес. Авторы, однако, не делают вывода о неблагоприятной прогностической роли мутаций BCL-6, указывая, что в этой группе у некоторых больных были неблагоприятные хромосомные аберрации.
Изолированный анализ показал отсутствие прогностической значимости мутаций BCL-6.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Гены ighv не подвергались соматической гипермутации что это значит
ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва
ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия
Гематологический научный центр Минздрава РФ, Москва, Россия
Гематологический научный центр Минздрава России, Москва
Молекулярный анализ генов иммуноглобулина в опухолевых B-клетках при лимфоме селезенки из клеток маргинальной зоны
Журнал: Терапевтический архив. 2015;87(7): 58-63
Джулакян У. Л., Бидерман Б. В., Гемджян Э. Г., Судариков А. Б., Савченко В. Г. Молекулярный анализ генов иммуноглобулина в опухолевых B-клетках при лимфоме селезенки из клеток маргинальной зоны. Терапевтический архив. 2015;87(7):58-63.
Dzhulakian U L, Biderman B V, Gemdzhyan E G, Sudarikov A B, Savchenko V G. Molecular analysis of immunoglobulin genes in the tumor B cells in splenic marginal zone lymphoma. Terapevticheskii Arkhiv. 2015;87(7):58-63.
https://doi.org/10.17116/terarkh201587758-63
ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва
Цель исследования. Определение классов генов IgVH, их соматической мутации и сопоставление этих данных с клинико-лабораторными параметрами пациентов и исходами заболевания. Материалы и методы. В исследование включили 24 пациента (9 мужчин и 15 женщин, в возрасте от 32 до 77 лет, медиана 60 лет) с лимфомой селезенки из клеток маргинальной зоны (ЛСКМЗ). Диагноз ЛСКМЗ устанавливали на основании гистологического и иммуногистохимического исследования трепанобиоптата костного мозга, иммунофенотипирования лимфоидных клеток периферической крови или пунктата костного мозга. Результаты. Проанализирован мутационный статус генов IgVH у всех 24 больных. Выявлено, что у 15 (62,5%) больных ЛСКМЗ опухолевые клетки содержат мутированные гены IgVH (в большинстве случаев участвуют гены семейства VH1), а у 9 (37,5%) — немутированные. Выявлена тенденция к более частому прогрессированию опухоли у пациентов с немутированными генами IgVH по сравнению с мутированными. Заключение. Наличие случаев ЛСКМЗ как с мутированными, так и немутированными генами IgVH, а также повышенная распространенность гена VH1—2, вероятно, указывает на молекулярную гетерогенность происхождения данной лимфомы.
ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва
ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия
Гематологический научный центр Минздрава РФ, Москва, Россия
Гематологический научный центр Минздрава России, Москва
АИГА — аутоиммунная гемолитическая анемия
ВБП — выживаемость без прогрессирования
ЛСКМЗ — лимфома селезенки из клеток маргинальной зоны
ОВ — общая выживаемость
B-ХЛЛ — В-клеточный хронический лимфолейкоз
SE — стандартная ошибка
В-клеточная лимфома селезенки из клеток маргинальной зоны (ЛСКМЗ) — В-клеточная опухоль, представленная морфологически зрелыми лимфоидными клетками, по своим иммунологическим характеристикам соответствующим лимфоцитам маргинальной зоны вторичного фолликула. Клинически характеризуется спленомегалией, умеренным лимфатическим лимфоцитозом, обычно очаговым поражением костного мозга (КМ), иногда умеренной секрецией моноклонального иммуноглобулина в сыворотке (обычно IgM или IgG) и/или моче и относительно доброкачественным течением [1—4].
Сопоставления данных иммунофенотипического исследования и мутационного статуса генов IgVH показали, что в маргинальных зонах содержится по меньшей мере 4 субпопуляции В-лимфоцитов с различным мутационным статусом [5—7]. Согласно результатам анализа вариабельного региона тяжелой цепи генов иммуноглобулинов (VH) из небольшого числа случаев ЛСКМЗ большинство из них подвергались соматической гипермутации, что имеет большое значение для представления о происхождении этой лимфомы [8—14].
Приводим собственные результаты, полученные в ходе проведенного исследования, цель которого состояла в определении классов генов IgVH, их соматической мутации и сопоставление этих данных с клинико-лабораторными параметрами пациентов и исходами заболевания.
Материалы и методы
Пациенты. Анализ генов VH проведен у 24 пациентов с ЛСКМЗ. Клинический диагноз установлен на основании стандартных критериев [2, 15]: результатов гистологического и иммуногистохимического исследований КМ, а также иммунофенотипирования лимфоидных клеток периферической крови и/или КМ.
Обследуемая популяция включала 15 женщин и 9 мужчин, медиана возраста при установлении диагноза составила 60 лет (диапазон от 32 до 71 лет). Их основные клинические характеристики отражены в табл. 1.
Таблица 1. Клинико-лабораторные данные больных ЛСКМЗ Примечание. * — данные представлены в виде медианы (диапазон). АИГА — аутоиммунная гемолитическая анемия; ЛДГ — лактатдегидрогеназа.
Анализ генов IgVH. Для определения клональной перестройки IgVH ДНК пациентов амплифицировали в 6 отдельных реакциях с использованием праймеров, специфичных к семействам VH, и консенсусного праймера JH [16, 17]. Клональный продукт очищали в 2% агарозном геле и элюировали с помощью набора Diatom DNA Elution («Биоком», Россия). Продукт полимеразной цепной реакции секвенировали с праймера, специфичного семейству перестроенного гена VH, с использованием набора флуоресцентно-меченных красителей Big Dye Terminator v1.1. («Applied Biosystems», США) на автоматическом секвенаторе ABI PRISM 3130 («Applied Biosystems», США). Полученные последовательности сравнивали с имеющимися в базе данных IgBlast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast). Пороговым значением сходства с герминальными генами считали 98%.
Статистический анализ. В качестве критериев («конечных точек») исходов лечения ЛСКМЗ использованы общая выживаемость (ОВ) и выживаемость без прогрессирования (ВБП). Для О.В. время отсчитывали от даты установления диагноза до летального исхода (от любой причины) или последней информации о пациенте, при ВБП — от даты спленэктомии (СЭ), рассматриваемой как начало лечения, до первой прогрессии или летального исхода (от любой причины). Согласно В. Cheson и соавт. [18] и S. Mulligan и соавт. [19], прогрессия при ЛСКМЗ заключается в появлении новых симптомов и локализаций болезни (в частности, экстранодальных очагов поражения), увеличении на 50% и более количества лимфоцитов в периферической крови или инфильтрате КМ, увеличении на 25% и более размеров исходной органомегалии, а также гистологические признаки крупноклеточной трансформации. ОВ и ВБП рассчитаны методом Каплана—Мейера, указана стандартная ошибка (SE). При однофакторном регрессионном анализе для выживаемости использована модель пропорциональных рисков Кокса. Выполнен частотный анализ для мутационного статуса генов IgVH и следующих (бинарно представленных) демографических и клинико-лабораторных характеристик: пол, возраст, В-симптомы, уровень ЛДГ, анемия, АИГА, тромбоцитопения, секреция парапротеина, гипоальбуминемия, гистологическая и крупноклеточная трансформации. Для расчетов использован статистический пакет SAS 9.1.
Результаты и обсуждение
Клиническая картина. Основные клинические характеристики показаны в табл. 1. У всех больных выполнена С.Э. Лимфаденопатия в виде увеличения лимфатических узлов ворот печени и/или селезенки имелась у 9 пациентов. Поражение К.М. выявлено у 100% больных, B-симптомы — у 20 (83,3%). Анемия, АИГА, тромбоцитопения (тромбоциты менее 100·10 9 /л) зафиксированы у 18, 3 и 12 пациентов соответственно. Парапротеинемия обнаружена у 12 пациентов, в большинстве случаев с изотипом IgM. Активность ЛДГ в сыворотке крови была повышена у 23 больных. Ни в одном случае серологических маркеров вирусных гепатитов В и С не обнаружено.
Гистологические и иммунофенотипические данные. Гистологическая картина трепанобиоптата КМ отражала разной степени выраженности поражение К.М. Морфологическая картина биоптата селезенки после СЭ соответствовала диагностическим критериям ЛСКМЗ [2, 15]. Иммунофенотипический анализ лимфоидных клеток периферической крови и/или пунктата КМ выявил характерную экспрессию пан-В-клеточных маркеров (CD20 и/или СD19 и/или CD79a) в отсутствие экспрессии дифференциально-диагностических антигенов, таких как CD10, CD5, CD23, CD103, CyclinD1. Отмечалась выраженная экспрессия легких цепей иммуноглобулинов: κ — в 19 и λ — в 5 случаях (см. табл. 1).
Лечение и наблюдение. Всем 24 пациентам выполнена СЭ в качестве терапии первого ряда, из них у 20 (83,3%) отмечено стабильное клинико-гематологическое улучшение. У 4 больных после СЭ развилась прогрессия заболевания, что обусловило необходимость проведение иммунохимиотерапии. Средний период наблюдения за больными составил 36,9 мес. От прогрессии заболевания, гистологически доказанной крупноклеточной трансформации умерли 2 больных на сроках наблюдения 68 и 70 мес соответственно.
Мутационный статус генов IgVH. Нуклеотидные последовательности генов IgVH определены у всех пациентов исследуемой группы. Если последовательность клонального гена VH совпадала с последовательностью одного из герминальных генов VH на 98% и более, данный ген VH считали немутированным. При условии сходства последовательности клонального гена VH с герминальным менее 98%, считали, что клетка — предшественница клона В-клеточного хронического лимфолейкоза (B-ХЛЛ) у данного больного подвергалась соматической гипермутации. Согласно этому критерию выявлены 9 (37,5%) пациентов с немутированными генами VH и 15 (62,5%) с мутированными. В исследуемой группе гены VH у 14 (58,4%) пациентов принадлежали к семейству VH1, у 12 (50% от общего числа) из них определен ген VH1—2, у 7 (29,1%) — гены семейства VH3 (из них у 3 ген VH3—7), в 2 (8,4%) случаях — гены семейства VH4 и в 1 (4,1%) — VH6 (табл. 2).
Таблица 2. Мутационный статус генов VH у больных ЛСКМЗ Примечание. Mut — мутированные гены; UMut — не мутированные гены; НД — нет данных.
ОВ за 7 лет (см. рисунок а) для всей группы больных ЛСКМЗ составила 60% (медиана общей продолжительности жизни 80 мес), 7-летняя ВБП (см. рисунок б) — 67% (медиана продолжительности жизни без прогрессирования 60 мес). Выявлена тенденция к более частому прогрессированию заболевания у пациентов с немутированными генами IgVH (n=9) по сравнению с таковой у пациентов с мутированными генами (n=15): ВБП 53 и 67% соответственно (см. рисунок в). Наличие немутированных генов IgVH ассоциировано с увеличением вероятности прогрессии заболевания примерно в 2 раза (отношение рисков 2,0 при 95% доверительном интервале от 1,1 до 3,5). В группе пациентов с мутированными генами IgVH медиана ВБП не достигнута.
Кривые 7-летней выживаемости для пациентов с ЛСКМЗ: ОВ (а), ВБП (б) и ВБП, стратифицированная по мутационному статусу генов IgVH (в).
Обсуждение
ЛСКМЗ, как правило, имеет неуклонно прогрессирующее клиническое течение, однако у отдельных больных имеет более агрессивное течение с признаками гистологической крупноклеточной трансформации, что ассоциируется с короткой продолжительностью жизни больных [1, 20—24]. Такая клиническая гетерогенность может отражать молекулярную гетерогенность ЛСКМЗ. Возможно, это связано с тем, что опухолевые B-клетки несут как мутированные [9, 10], так и не мутированные гены IgVH [11, 12, 25—28]. Прогностическая значимость этих молекулярных данных пока неясна, хотя в некоторых работах продемонстрированы немутированные гены IgVH при более агрессивном течении ЛСКМЗ [23, 27].
В настоящем исследовании мы проанализировали мутации генов IgVH у 24 больных ЛСКМЗ, которым диагноз установлен до СЭ на основании клинических и иммуноморфологических данных [1, 2, 29, 30]. Наши результаты показали, что у 15 (62,5%) больных ЛСКМЗ опухолевые клетки содержат мутированные гены IgVH (в большинстве случаев участвуют гены семейства VH1), а у 9 (37,5%) — немутированные.
Анализ также показал, что в 58,3% случаев при ЛСКМЗ участвуют гены семейства VH1 (в 12 случаев из 14 это ген VH1—2,), в меньшей степени — семейства VH3 и VH4. Такое избирательное участие гена VH1—2 может быть связано с патогенезом этой лимфомы.
Различные исследования при В-ХЛЛ выявили существенную неоднородность и агрессивное течение в случаях с немутированными генами [31]. Аналогичные исследования при ЛСКМЗ также показывают более агрессивное клиническое течение, гистологические признаки трансформации и плохой прогноз в случаях с немутированными генами IgVH [23—25, 27, 32].
В проведенном поисковом исследовании выявлено статистически значимое различие в группах с мутированными и немутированными генами IgVH по следующим параметрам: В-симптомы, секреция парапротеина и АИГА. В-симптомы и парапротеинемия встречались чаще у больных с мутированными, а АИГА — с немутированными генами IgVH (табл. 3). Кроме того, выявлена тенденция к более частому прогрессированию заболевания у пациентов с немутированными генами IgVH. Дальнейшее выяснение прогностической значимости мутационного статуса генов IgVH требует проведения многофакторного анализа на большем объеме выборки.
Таблица 3. Корреляция мутационного статуса генов IgVH с клинико-лабораторными параметрами Примечание. * — различие по сравнению с данными в группе с мутациями статистически значимо (р
Заключение
Данное исследование показало, что в большинстве случаев при ЛСКМЗ участвуют гены семейства VH1, могут быть случаи без мутаций генов IgVH, что указывает на молекулярную гетерогенность происхождения данной лимфомы. Следует также отметить, что выявлена тенденция к частому прогрессированию ЛСКМЗ в случаях с немутированными генами IgVH.
B-клеточные клоны как ранние маркеры для хронического лимфоцитарного лейкоза
B-Cell Clones as Early Markers for Chronic Lymphocytic Leukemia
Landgren O, Albitar M, Ma W, Abbas Fi, Hayes RB, Ghia P, Marti GE, Caporaso NE
Опубликовано: N Engl J Med. 2009 Feb 12;360(7):659-667.
Чтобы ответить на этот вопрос, Landgren с соавторами провели анализ, используя медицинские, клинические и лабораторные данные (образцы крови), собранные во время исследования PLCO, посвященного изучению опухолей простаты, легкого, яичников и колоректального рака. Результаты показали, что почти в каждом случае перед развитием CLL присутствовал и был диагностирован MBL. Поскольку в сравнении с пациентами, имеющими мутацию тяжелой цепи иммуноглобулина мутанта (IGHV), у больных CLL прогноз лучше, были характеризованы и сравнены генный статус, генные перестановки IGHV в преддиагностических клонах B-клетки и лейкемических клетках, собранных при диагностике. В большинстве случаев были обнаружены мутации IGHV.
С 1992 г. до 2001 г. в исследовании PLCO было зарегистрировано 150 000 участников (в возрасте 55-74 лет). Из 129 пациентов, у которых был впоследствии диагностирован CLL, 45 имели криоконсервированные образцы крови, позволившие провести это исследование. Кроме того, 10 пациентов без CLL вошли в контрольную группу. Возраст развития CLL соответствовал 70 годам, большинство пациентов (67%) – мужчины. Медиана времени между сбором преддиагностических клеток периферической крови и диагнозом CLL составлял 3 года. Из 43 пациентов большинство (93%) имели стадию I или 0 по Rai.
Два отдельных испытания FC с 6 цветами и обратная-PCR использовалось для оценки статуса MBL. Использование FC с 6 цветами антител против CD45, CD19, CD5, CD10, каппы, и лямбды показало, что преддиагностические клоны B клетки присутствовали у 42 из 45 пациентов (93%). У 3 пациентов были неадекватные типовые количества для FC. Последующее исследование генных реаранжировок IGHV-методом показало, что все, кроме 2 пациентов, были положительны для преддиагностических клонов B-клетки. Всего 44 из этих 45 пациентов (98%) имели преддиагностические клоны В-клетки. 41 пациент (91%) был положительным по обоими испытаниям. Отрицательные результаты наблюдались по всем предметам контроля.
Ген IGHV был исследован у 35 из 43 пациентов, у 77% пациентов был мутант генный статус IGHV по сравнению с 23% невидоизмененных. Гены IGHV3-подгруппы были обнаружены в 16 клонах (46%), 6 из которых были последовательностями IGHV3–23. Гены IGHV4-подгруппы были найдены в 9 клонах (26%), у 4 из которых были гены подгруппы IGHV4–34. Среди 25 пациентов, для которых результаты FC были доступны и прежде, и при диагнозе CLL, образцы ограничения легкой цепи были идентичны.
Исследование показало присутствие MBL в образцах периферической крови 44 из 45 пациентов (98%) с развившимся впоследствии CLL, независимо от стадии Rai. MBL перед диагнозом CLL был обнаружен в интервале от 6 месяцев до 6 лет. Для объяснения механизмов, вовлеченных в патогенез MBL и прогрессию к CLL, необходимы предклинические исследования населения.
Copyright © 2008 