гистоверификация что это такое

Морфологическая верификация опухолей

— Соскобы и мазки-отпечатки. Являются распространенным способом диагностики поверхностных изъязвленных опухолей.

— Открытая биопсия. Открытая биопсия опухоли выполняется, как правило, после неудачных попыток верифицировать диагноз вышеуказанными методами или из-за необходимости получить больше ткани для выполнения некоторых специфических исследований, например для определения рецепторов гормонов при опухолях молочной железы, иммуногистохимического исследования при гематосаркомах. Биопсия инцизионная предполагает получение участка ткани непосредственно из патологического очага, выполняется под местной анестезией (из опухоли молочной железы, мягких тканей) или под наркозом (из костных опухолей). Биопсия эксцизионная выполняется как хирургическое вмешательство с удалением опухоли в пределах здоровых тканей. Трепанобиопсия в основном используется для исследования новообразований молочной железы, костей, мягкотканных опухолей. При невозможности верифицировать злокачественность опухоли на диагностическом этапе планируют срочное гистологическое исследование во время операции.Эти способы обычно дают достаточно материала для морфологической верификации диагноза. Наиболее информативный материал получают из участков опухоли на границе со здоровой тканью.

— Трепан-биопсия. Гистологическая верификация может быть получена при использовании специальной иглы или трепана, при этом изымается столбик измененной ткани, пригодный для гистологического исследования. Особенно важным в плане адекватной диагностики распространенности опухолей бывает исследование сомнительных по клиническим данным образований в зонах регионарного метастазирования. В большинстве же случаев сопоставление клинических проявлений опухоли с ее симптомами вне основного очага не требует верификации всех обнаруженных метастазов. Производят морфологическое исследование наиболее доступных вторичных опухолей, что само по себе делает ясным представление об истинной распространенности заболевания. Верификация диагноза осуществляется путем чрезкожной пункции метастаза или забора материала при лапаро- или торакоскопии.

Источник

Как проводится гистологическое исследование: виды, методы, особенности

Злокачественные новообразования — это группа заболеваний, насчитывающая несколько тысяч видов опухолей разных типов и разной степени злокачественности. Они подразделяются на большие группы в зависимости от того из каких тканей они развиваются: если из эпителиальных (барьерных) — то это раки, если из соединительных тканей (мягких тканей и костей) – саркомы, если из лимфоидных (иммунных) – лимфомы/лейкозы. От того насколько правильно верифицирована опухоль (определен ее тип, степень злокачественности и другие характеристики) зависит правильность и эффективность лечения. Важную роль в этом играют гистологические исследования.

О том, как проходят гистологические исследования, какие задачи кроме диагностических они позволяют решать, что влияет на сроки их выполнения рассказывает заведующая патологоанатомическим отделением с прозектурой НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, к.м.н. Анна Сергеевна Артемьева.

Что служит материалом для патоморфологических (гистологических) исследований?

Процесс получения фрагмента ткани (биоптата) — биопсия – это несколько разных способов забора материала для гистологического исследования.

Биопсию внутренних органов делают под УЗИ-навигацией, либо с помощью хирургического вмешательства.

Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?

1 Этап. Фиксация — «консервирование» биоптата в формалине — специальном химическом растворе, который предотвращает гниение, позволяет сохранить структуры ткани.

Фиксация биоптата может занимать от 6 до 24 часов – в зависимости от его вида и размера.

Операционный материал фиксируется дольше, в несколько этапов. Сначала предварительная фиксация, которая занимает примерно 12 часов. Затем вырезка нужных фрагментов и повторная фиксация еще 24 часа.

Соотношение объема материала к объему формалина должно быть 1:20.

2 Этап. Процессинг — процесс обезвоживания, обезжиривания и пропитки материала парафином. Автомат перемещает кусочек материала из раствора в раствор.

В качестве растворов применяются: абсолютированный изопропиловый спирт (6-8 смен), ксилол (2 смены), расплавленный парафин (2 смены).

Программа разнится для «жирного» материала (к которым относятся, например, ткани молочной железы) и «нежирного» – 36 и 24 часа соответственно.

Процесс получения парафиновых блоков.

3 Этап. Изготовление парафинового блока. Кусок материала помещается в форму с расплавленным парафином (уже другим нежели во время процессинга – с более высокой температурой плавления) и охлаждается. Выполняется вручную, сложно ускорить.

4 Этап. Изготовление срезов. Толщина образца — кусочка ткани, залитого в парафин – 1-3 мм. Толщина каждого среза 4-5 мкм (0,004-0,005 мм). Выполняет лаборант с использованием специального инструмента – микротома.

Срезы монтируются на стекла и должны высохнуть.

Несмотря на то, что часть материала теряется при выравнивании в микротоме, при должном профессионализме, из одного образца — материала от одной биопсии, операционного материала от одной опухоли, возможно изготовить около 100 стекол (микропрепаратов).

Для чего делаются срезы?

Срезы делаются для рутинной окраски гематоксилинном и эозином, иммуногистохимического исследования и других видов исследований.

Срезы для всех исследований используются одинаковые, различается окраска, могут отличаться стекла, на которые они монтируются, так для ИГХ и FISH нужны специальные адгезивные стекла или заряженные стекла.

Блоки и стекла способны храниться долгие годы и использоваться для проведения дополнительных гистологических исследований, пересмотров, а также в научных целях.

Архив гистологических материалов собирается в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова с 1927 года и содержит более 10 млн единиц хранения (микропрепараты — стекла, парафиновые блоки, архивные карточки, влажный архив).

Какие виды гистологических исследований наиболее информативны?

Что позволяют определить разные виды гистологических исследований

Гистологическое исследование – что это такое?

Позволяет верифицировать опухоль – то есть определить из каких клеток она состоит (из какой ткани она развивается), степень ее дифференцировки (зрелости).

Рутинная окраска, выполняющаяся при гистологическом исследовании, позволяет выявить патологический процесс в анализируемом материале (биоптате, операционном материале):

Также, в большинстве случаев, благодаря рутинной окраске, можно определить степень злокачественности опухоли и, если она достаточно зрелая, то какова ее природа.

Окрашенные срезы под микроскопом

Инвазивный протоковый рак er 100%.

Карцинома сигмовидной кишки.

Крупноклеточная нейроэндокринная опухоль.

МТС крупноклеточной нейроэндокринной опухоли.

Неспецифический рак молочной железы. Участок in situ карциномы внутри протока, криброзного типа.

Низкодифферинцированный рак пищевода.

При гистологическом исследовании биоптата и операционного материала можно оценить распространенность: размер опухоли и прорастание в окружающие ткани, насколько затронуты лимфоузлы и есть ли метастазы в отдаленные органы (если эти все структуры присланы для гистологического исследования). При консультации готовых микропрепаратов – стекол, это, как правило, невозможно, если опухоль больше размеров гистологической кассеты или рассечена предыдущим исследователем и не предоставлены данные макроскопического исследования.

Во время гистологического исследования изучаются все стекла от одного образца – материала, полученного от одного вмешательства — одной операции или одной биопсии, вне зависимости от их количества, это считается одной консультацией.

Сроки выполнения гистологического исследования зависят от количества микропрепаратов и от категории сложности того процесса, который в них обнаруживается, сроки могут удлиняться, особенно при необходимости использования дополнительных методов исследования и анализа дополнительных сведений. На сроки выполнения гистологического исследования влияет полнота предоставленной пациентом клинической информации, в том числе данных уже проведенных исследований.

Иммуногистохимия (ИГХ)

Сложное многоэтапное исследование, выполняется после гистологического исследования на том же материале. Опухолевые срезы окрашиваются антителами, которые способны связываться антигенами (белками), которые несут опухолевые клетки. Разные опухолевые клетки несут разные антигены, к каждому из которых подобно ключа к замку подходит антитело.

Один из этапов ИГХ

ИГХ исследование — это комбинаторика. 100% специфичных и чувствительных к какой-то опухоли маркеров не существует, но есть набор антигенов, которые в определенном типе опухоль должны быть и набор тех, которых там быть не должно, таким образом ИГХ-панель строится так чтобы включать несколько антител, которые должны быть позитивны и несколько, которые должны быть негативны. Для разных опухолей различаются эти наборы позитивных/негативных маркеров.

При проведении прогностической ИГХ – выявлении маркеров чувствительности к терапии определяется набор таких маркеров для конкретных опухолей, например, рака молочной железы: рецепторы стероидных гормонов (эстроген, прогестерон), рецептор эпидермального фактора роста (HER2) и индекс пролиферативной активности Ki67 (скорости деления клеток).

Стекла окрашиваются последовательно — различными антителами красятся наборы маркеров в несколько этапов, процесс окраски стекол одним антителом занимает 48 часов.

Таким образом, каждое антитело наносится на отдельный срез ткани, монтированный на отдельное стекло, как правило с соответствующим внешним контролем, количество реакций (используемых антител) и этапов окраски может существенно варьировать в зависимости от конкретной диагностической ситуации, все зависит от индивидуальных особенностей опухоли. Проводится такое количество окрасок, которое необходимо для того, чтобы выявить наиболее характерный для определенной опухоли набор позитивных и негативных маркеров.

Кому-то для этого будет достаточно 5 антител, а кому-то необходимо сделать 20 окрасок и более. Максимальное количество окрасок, которое нам приходилось делать – 212.

Поэтому точные сроки и стоимость этого исследования невозможно определить заранее. Разные по течению и прогнозу опухоли могут быть очень похожи друг на друга, только минимальные различия в окрашивании, с учетом клинических данных и данных других методов обследования, могут позволить установить верный диагноз.

Есть целый ряд доброкачественных опухолей, симулирующих злокачественные, в том числе высокоагрессивные, а некоторые злокачественные высоко дифференцированные опухоли трудно отличить от воспалительных и реактивных процессов. В таких ситуациях только опыт и квалификация патоморфолога, анализ всего комплекса доступной информации (снимки КТ, МРТ, рентген, протокол операции, и др.) позволяют поставить диагноз.

В грамотной интерпретации результатов ИГХ очень важна роль эксперта, ведь те случаи, с которыми приходится работать, в большинстве своем, сложные. Практически не существует антител, которые могут выступать в качестве 100%-х маркеров той или иной опухоли, врачу всегда приходится взвешивать различные вероятности.

Что определяется с помощью ИГХ?

Иммуногистохимия позволяет оценить потенциальный темп роста опухоли, ответ на химио-, таргетную, гормональную терапию.

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH-тест)

Это метод молекулярно-генетической диагностики в ткани.

FISH проводится в срезе ткани и позволяет привязать генетическую перестройку к конкретной опухолевой клетке.

В этом тесте также используются специальные красители, которые связываются только с определенными участками хромосом. Их называют зондами, которые могут быть помечены флуоресцентным или хромогенным красителем, визуализирующимися при помощи флуоресцентного или светового микроскопа.

Технические операции по подготовке гистологических стекол к этому исследованию занимает 2 рабочих дня.

Анализ препарата с помощью многоголового микроскопа.

Полученные микропрепараты очень чувствительны к внешней среде – они могут выцвести со временем, чтобы избежать потерь информации все FISH-препараты сканируются, создается их цифровая копия, которая доступна для внешнего пересмотра. Специалисты просматривают флуоресцирующий материал в темном поле, в анализе препарата принимают участие как минимум 2 специалиста. При необходимости используется и цифровой анализ.

Что определяется с помощью FISH-теста?

FISH-тест позволят диагностировать некоторые виды опухолей, определяет целесообразность использования некоторых химиотерапевтических препаратов.

Проведение гистологического исследования, и в первую очередь FISH-теста — это экспертная работа, которая зависит от квалификации специалиста. Очень многие мутации, которые выявляются в опухолях, не всегда являются метками опухолей, они могут находиться и в доброкачественных образованиях или нормальных тканях.

За год патологоанатомическое отделение НМИЦ онкологии имени Н.Н. Петрова выполняет около 20000 гистологических исследований (пациентов), из них около 5000 консультативных случаев (пересмотров), более 30000 ИГХ исследований, а также участвует в программе внешнего контроля качества ИГХ исследований NordIQ.

Специалисты отделения обладают огромным опытом проведения гистологических исследований и экспертными компетенциями.

Скорость выполнения гистологических исследований и адекватность гистологического заключения зависят от ряда факторов:

После выполнения гистологического исследования пациент получает гистологическое заключение/протокол исследования гистологического материала.

Расшифровка гистологического исследования: на что обратить внимание?

Гистологическое заключение включает в себя несколько рубрик (полей):

Макроскопическое описание

Заполняется как для биоптатов — не обязательно, так и для операционного материала, для которого имеет крайне важное значение в ряде случаев.

Микроскопическое описание

Описание изменений на микроскопическом уровне, не обязательно к заполнению, так как вся необходимая информация может быть отражена в поле «заключение».

Результаты иммуногистохимического исследования

В этом поле описано какие антитела использовались в данном случае и каков результат окрашивания: наличие окрашивание или его отсутствие, локализация в клетке при необходимости, а также процент позитивных клеток и интенсивность реакции, когда это имеет значение.

Патологоанатомическое заключение

Содержит нозологическую/классификационную единицу, если ее возможно установить по исследованному материалу, то есть дает ответы на вопросы:

Также приводятся все необходимые прогностические данные: степень дифференцировки, параметры, влияющие на стадию, состояние краев резекции, если возможно их оценить и т.п.

Дополнительные замечания и рекомендации

Поле может содержать комментарии, относительно возможного направления дальнейшего обследования, вероятности того или иного диагноза, необходимости ознакомиться с теми или иными клиническими данными и др.

Мы не рекомендуем пациентам самостоятельно заниматься расшифровкой показателей гистологического исследования, используя информацию, полученную на различных Интернет-сайтах и форумах пациентов, так как на интерпретацию данных влияет большое количество факторов, в том числе, возраст пациента, данные других исследований и др.

Расшифровкой исследования может заниматься только специалист – врач онколог по профилю заболевания!

Авторская публикация:
АРТЕМЬЕВА АННА СЕРГЕЕВНА
заведующий патологоанатомического отделения с прозектурой ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, кандидат медицинских наук

Источник

Верификация опухоли – варианты и методы выявления рака

Важный этап диагностики рака – определение гистологического типа злокачественного новообразования. Верификация опухоли – это оценка морфологического (клеточно-тканевого) варианта карциномы, предполагающая проведение исследований с биопсийным материалом. Нельзя начинать лечение, не зная гистотип (тканевой состав) и клеточную дифференцировку раковой опухоли.

Выяснив клеточно-тканевой состав опухоли, можно начинать терапию

Верификация опухоли

До момента применения комбинированной терапии надо точно выяснить морфологическую структуру новообразования. Вражеская армия может состоять из агрессивных молодых и необученных бойцов, с которыми легко справится иммунная система. Или противоопухолевой защите придется столкнуться с живучим, хитрым и коварным противником, способным быстро изменяться и приспосабливаться.

Зная состав вражеского войска, можно предвидеть исход битвы.

Верификация опухоли – это микроскопическая оценка взятых при биопсии тканей, на основе которых врач-лаборант точно определит цитоморфологический состав злокачественного новообразования: важен не только факт обнаружения рака, но и гистологический вариант опухолевого роста с отличием от исходных здоровых клеток. Зная состав вражеского войска, можно предвидеть исход битвы.

Варианты биопсийного материала

Врач-лаборант, выполняющий морфологические исследования, будет работать со следующими видами биопсийного материала:

Любая ткань может стать основой для проведения качественной морфологической диагностики, но при одном важном условии – во время выполнения биопсии опухоли надо взять неповрежденный участок из карциномы. Чем сохраннее биоптат, тем качественнее диагностика.

Последовательность морфологических изменений

Рак в своем развитии проходит несколько стадий, поэтому врач-гистолог при проведении микроскопического исследования может увидеть разнообразные картины опухолевого роста – от предраковых изменений до выявления признаков распада злокачественного узла. Верификация опухоли – это обнаружение при исследовании одного из вариантов типичной последовательности онкологических изменений в тканях:

Временные промежутки между этапами формирования опухоли относительны – иногда проходят десятилетия от первичных доброкачественных процессов к инвазии, в худших случаях от дисплазии к раку – за месяцы.

Врач-гистолог по срезам тканей поставит морфологический диагноз

Верификация опухоли: методы морфологии

Стандартный вариант проведения гистологического исследования – приготовление тончайших срезов биопсийных тканей с последующей микроскопией материала. Эта методика позволяет получить массу полезной информации о клеточно-тканевом составе опухоли. Кроме этого, верификация опухоли – это следующие диагностические методы:

Вне зависимости от методики, основная цель гистологического исследования – определение типа опухоли и оценка клеточных изменений: зная состав наступающей армии, можно выбрать тактику защиты или принять решение о контрнаступлении.

Влияние лечебных факторов на опухоль

Далеко не всегда с момента начала комбинированной терапии можно получить желаемый положительный результат. Ни хирургическая операция, ни химиотерапия, ни курсы облучения не гарантируют полного излечения, что объясняется способностью опухоли приспосабливаться и видоизменяться. Значительная часть вражеского войска погибнет, но те бойцы, которые смогли выжить, дадут новые генерации солдат, способных противостоять лечебным воздействиям. Лекарственные препараты и облучение способны разрушить опухолевую ткань, что приведет к некрозу и воспалению, но даже единичный метастаз, сохранившийся в лимфоузле, может стать основой для рецидива опухоли. Это вовсе не означает, что рак непобедим: зная, что враг коварен и хитер, нельзя расслабляться и успокаиваться после локальной победы. Длительное наблюдение у врача, поддержка противоопухолевого иммунитета и регулярные контрольные обследования помогут избавиться от болезни.

Источник

Гистологическая верификация заболевания до операции

В сомнительных случаях диагноз аденокарциномы ПЖ можно подтвердить после выполнения чрескожной тонкоигольной биопсии под контролем УЗИ с последующим гистологическим исследованием биоптата. Однако у больных с резектабельными опухолями биопсия, осуществляемая под контролем ЭУЗИ, более предпочтительна, чем чрескожная пункционная биопсия под контролем УЗИ или КТ. Это обстоятельство обусловлено отсутствием риска возникновения имплантационных метастазов в передней брюшной стенке при выполнении диагностической манипуляции через просвет полого органа [33]. Тонкоигольная биопсия под контролем ЭУЗИ является наиболее достоверной в дифференциальной диагностике опухолевых кистозных поражений и псевдокист ПЖ [34].

При отрицательном результате гистологического исследования биоптата показано проведение повторной биопсии под контролем ЭУЗИ [30].

Рекомендации:

1). Если диагноз веско аргументирован данными комплексного обследования, то гистологическая верификация диагноза рака ПЖ до операции не требуется, чтобы не приводить к задержке хирургического лечения.

2). При трудностях дифференциальной диагностики рака и хронического панкреатита необходимо производить тонкоигольную биопсию под контролем ЭУЗИ.

3). Выполнение чрескожной тонкоигольной биопсии под контролем УЗИ показано при наличии метастатического поражения печени и отдаленных лимфогенных метастазов, которая является обязательной для морфологической характеристики нерезектабельной опухоли и выбора патогенетически обоснованной адъювантной и неоадъювантной терапии.

Опухолевые маркеры

Диагностическая значимость опухоле-ассоциированных антигенов (CEA, CA125) в ряде случаев невысока. Большую диагностическую ценность имеет уровень карбогидратного антигена (CA) 19-9 в крови. Но CA 19-9 обычно повышается при заболеваниях ПЖ, печени и желчных протоков, а также при многих злокачественных опухолях и, таким образом, не является специфичным для рака ПЖ. Однако степень увеличения CA 19-9 имеет значение при дифференцировании аденокарциномы и воспалительных заболеваний железы [35], уменьшение уровня CA 19-9 в динамике коррелирует с лучшей выживаемостью больных раком ПЖ после операции [36] или химиотерапии [37, 38].

Рекомендации:

1). Уровень СА 19-9 сыворотки крови необходимо определять до операции и в различные сроки после удаления резектабельной опухоли ПЖ для своевременной диагностики возможного рецидива заболевания (категория 2B).

Лапароскопическая диагностика

Лапароскопия является ценным способом диагностики при определении мелких имплантационных метастазов на брюшине или в печени, которые могут быть не визуализированы при УЗИ, КТ и МРТ [39].

Рекомендации:

1). При стадировании для исключения метастазов возможно использование диагностической лапароскопии, как до операции, так и перед выполнением химио- и лучевой терапии (категория 2B).

2). У больных с высоким риском распространенности онкологического процесса (сомнительная резектабельность опухоли, повышенный уровень CA19-9, первичная опухоль больших размеров) диагностическая лапароскопия обязательна (категория 2В).

2). Положительный результат цитологического исследования смывов из брюшной полости, полученных при лапароскопии или лапаротомии, следует расценивать как M1. Если при этом выполнена резекция ПЖ, то отдаленные результаты надо трактовать как у больных с отдаленными метастазами (IV стадии).

Хирургическое лечение

На момент диагностики резектабельная опухоль выявляется только в 10-20% случаев. В остальных случаях на ранних этапах диагностики выявляются «запущенные» формы заболевания: в 20-30% случаев – местнораспространенный, а в 60-70% случаев – распространенный рак железы.

Хирургическое удаление опухоли остается единственным методом, способным избавить от заболевания. Однако достичь стойкого эффекта в большинстве случаев рака ПЖ можно только при мультимодальном подходе с использованием химио-, лучевой и таргетной терапией.

При раке ПЖ с органными, перитонеальными и плевральными метастазами резекция ПЖ нецелесообразна. Однако при локорегиональной распространенности заболевания подходы к хирургическому лечению различны.

Используя только резекционный подход у более 80% больных раком железы нельзя излечить от заболевания [40]. В специализированных центрах удалось добиться снижения ранней послеоперационной летальности (менее 5% случаев) после различных по объему резекционных вмешательств на ПЖ [41]. Но даже при самых оптимальных условиях показатели 5-летней выживаемости оперированных больных невысоки (около 20%) с медианой выживаемостью 15-19 месяцев [42].

Достоверными прогностическими факторами, определяющими отдаленную выживаемость больных протоковой аденокарциномой, является R₀-резекция, содержание ДНК в опухолевых клетках, размеры опухоли и отсутствие лимфогенных метастазов [43, 44].

Радикальные операции

Только полное удаление первичной опухоли и ее метастазов (R₀-резекции) характеризуется хорошими отдаленными результатами [45, 46]. Чтобы избежать оставления опухолевых клеток по линии резекции, при ПДР необходима тщательная диссекция периваскулярных тканей вдоль верхнебрыжеечных сосудов: деликатное отделение крючковидного отростка от мезентерикопортального венозного ствола (при отсутствии признаков его инвазии опухолью); резекция и протезирование вены (при малейших сомнениях); скелетизация ВБА по всей ее окружности, вплоть до адвентиции, в пределах ширины крючковидного отростка [47, 48, 49]. Достоверных данных, подтверждающих целесообразность расширения показаний к выполнению резекций магистральных артерий, нет [50].

Рекомендации:

1). Операции должны выполняться в учреждениях, обладающих опытом выполнения значительного числа резекций ПЖ (не менее 20 операций ежегодно).

2). В большинстве случаев – при отсутствии инвазии в стенку луковицы ДПК – показано выполнение ПДР с сохранением привратника.

3). Окончательное стадирование протоковой аденокарциномы головки ПЖ должно осуществляться только после тщательного патоморфологического и иммуногистохимического изучения опухолевой ткани, а также удаленных операционных препаратов с оценкой возможности опухолевой инвазии по линии резекции железы (крючковидного отростка, перешейка), желчного протока и кишки; ретроперитонеальной поверхности головки железы (в проекции верхнебрыжеечной вены и артерии), лимфогенного метастазирования.

Источник